緩衝液に添加する変性剤の役割【DNAも変性させる変性剤】（2）

 

本記事は，このような「なぜ？どうして？」にお答えします．

 

こんにちは！

博士号を取得後，派遣社員として基礎研究に従事しているフールです．

前回に引き続き，緩衝液に加える「変性剤」をまとめています．

本記事で紹介する変性剤は，タンパク質だけでなく，DNAも変性させることもできます．

 

尿素の役割

水素結合を切断することで，二本鎖DNAやタンパク質を変性させます．

DNAシークエンス（サンガー法）では，一本鎖DNAの状態を維持するために使用することがあります．

また，ELISA系の洗浄で使用するバッファーに，尿素を添加した洗浄液を用いることがあります．

タンパク変性剤による洗浄処理は，抗原への結合力が弱い抗体（低アビディティーな抗体）を反応系から取り除くことを可能にします．

これにより，サンプル中に含まれる抗体の親和性を測定することができます．

ホルムアミドの役割

水素結合を切断することで，二本鎖DNAを変性させます．

DNAシークエンス（サンガー法）では，一本鎖DNAの状態を維持するために使用することが多いです．

変性剤を加えた後，さらに95 ℃で加熱することにより，長鎖の二本鎖DNA（および複雑な高次構造で安定化したDNAやRNA）も効果的に変性させます．

ゆっくり冷ますと，相補的な1本鎖どうしが再び結合してしまいます．

一本鎖DNAの状態を維持するためには，氷上で急冷することも忘れずに．

もっと勉強したい方へ

・HEDMAN, Klaus, et al. Maturation of immunoglobulin G avidity after rubella vaccination studied by an enzyme linked immunosorbent assay (avidity‐ELISA) and by haemolysis typing. Journal of medical virology, 1989, 27.4: 293-298.

・AGUADO-MARTINEZ, A., et al. Use of avidity enzyme-linked immunosorbent assay and avidity Western blot to discriminate between acute and chronic Neospora caninum infection in cattle. Journal of veterinary diagnostic investigation, 2005, 17.5: 442-450.

 

以上，緩衝液に加える「変性剤」のまとめでした．

最後までお付き合いいただきありがとうございました．

次回もよろしくお願いいたします．

2020年1月6日　フール